QIAGEN Plasmid Kits12123質(zhì)粒純化
上海優(yōu)高玖全新推薦,
QIAGEN Plasmid Kits應(yīng)用重力流陰離子交換柱純化轉(zhuǎn)染級(jí)質(zhì)粒DNA。該試劑盒可純化獲得至多10 mg的質(zhì)粒DNA。離心獲得澄清的裂解產(chǎn)物和異丙醇沉淀。
轉(zhuǎn)染效率與質(zhì)粒純化方法。
采用不同方法制備pRSVcat DNA,通過脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染將其導(dǎo)入的細(xì)胞系內(nèi),40小時(shí)后測(cè)定CAT表達(dá)水平,確定轉(zhuǎn)染效率。每個(gè)柱形代表4個(gè)獨(dú)立的轉(zhuǎn)錄的平均值(2個(gè)質(zhì)粒制備物分別轉(zhuǎn)染2次)。使用QIAGEN Plasmid Kit可獲得zui高的轉(zhuǎn)染效率。
QIAGEN Plasmid Kit實(shí)驗(yàn)流程。
將中性細(xì)菌裂解物直接置于QIAfilter Cartridge內(nèi)孵育,數(shù)秒內(nèi)即可過濾澄清。然后將澄清的裂解物上樣至陰離子交換純化柱,在適當(dāng)?shù)牡望}和pH條件下,質(zhì)粒DNA會(huì)選擇性地結(jié)合上去。利用中鹽濃度的洗滌液去除RNA、蛋白質(zhì)、代謝物及其他低分子量雜質(zhì),使用高鹽緩沖液洗脫超純的質(zhì)粒DNA。利用異丙醇沉淀對(duì)DNA進(jìn)行濃縮并脫鹽,并通過離心收集。
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