1. 如何保存合成的多肽?
多肽在-20℃很穩(wěn)定,特別是冷凍干燥并保存在干燥器中,在將它們暴露于空氣之前, 冷凍干燥多肽可以放于室溫。這將是濕度影響減少,當(dāng)無(wú)法冷凍干燥時(shí),的方法是以小的工作樣量存放。
對(duì)于含Cys, Met orTrP的多肽,脫氧緩沖劑對(duì)其溶解*,因?yàn)檫@種多肽可易空氣氧化, 在封瓶前,慢慢流過(guò)多肽的氮?dú)饣驓鍤庖矔?huì)降低氧化作用。含Gln或Asn的多肽也容易降解,所有這些肽與不含這些有問(wèn)題解苷的那些肽相比,生命期有限。
2. 多肽的溶解性怎樣?都溶于哪些溶劑?
大多數(shù)肽的溶劑是超純抽氣水。稀乙酸或氨水分別對(duì)于堿性或酸性多肽的溶解很重要。這些方法不溶的多肽, 需要DMF(二甲基甲酰胺)、脲、guanidinium(胍鹽)、chloride(氯化物)或acetonitrile(乙腈)來(lái)溶解,這些溶劑可能某些實(shí)驗(yàn)有副作用。所以我們建議設(shè)計(jì)多肽時(shí)要加注意。
殘基Ala, Cys , Ile, Leu, Met, Phe和Val將全增加多肽的溶解難度。
3. 多肽的保存如何操作?
包裝 1mg或更少的多肽按凈重包裝,聲明的小瓶重不含相關(guān)抗離子和水。 例如,氨基酸分析決定的肽含量是80%, 在1mg樣品中,那么瓶中毛重是1.25mg。
大量的多肽以毛重算。標(biāo)出的重量含相關(guān)抗離子和水, 例如,25mg樣品中肽百分比為90%,那么,實(shí)際肽量為25mg×90%=22.5mg
不要把肽含量和純度搞混了。肽的純度可能是100%, 而肽含量相關(guān)帶電基團(tuán)(如Arg, Lys )的抗離子量和肽親水性決定。這是合成肽的本身特性。
所有產(chǎn)品應(yīng)存于冰箱, 為-20℃。多數(shù)肽以此方法可以存放幾年不變。
溶液肽遠(yuǎn)比凍干形式不穩(wěn)定,溶液應(yīng)為中性pH(pH5-7), -20℃保存的,為避免樣品的反復(fù)凍融, 分成小樣存放。一份樣品融凍后未用完, 應(yīng)扔掉,細(xì)菌降解有時(shí)會(huì)成為溶液肽的麻煩, 為克服此,肽應(yīng)溶于無(wú)菌水, 或肽溶液用0.2μ M濾膜過(guò)濾。
4. 如何重建多肽重建過(guò)程如何操作?
多數(shù)肽溶于無(wú)菌蒸溜水。初次溶解時(shí),要注意使初始濃度比要求濃度大,如果多肽僅有限溶解性, 這便允許加入其它溶解劑或緩沖鹽。
如果多肽在水中的溶解性有限,有幾種選擇可幫助溶解:
對(duì)堿性肽用稀乙酸(含Arg , Lys , His)
酸性肽用稀氨水(含Asp, lu)
對(duì)極疏水的肽用10%有機(jī)修飾物(acetonitrile , Methanol)
極不溶的肽用DM50或DMF
guanidine hydrochloride或脲的濃溶液也很有用, 與上述方法合用, 聲處理也是溶解多肽的有效手段。
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